La validación reciente de los kits de prueba de EFB en América del Norte podría facilitar el diagnóstico de la enfermedad.
La loque europea, o EFB, puede ser difícil de identificar Aunque la presentación clásica (larvas descoloridas torcidas como un sacacorchos) es fácil de reconocer, hay muchas otras formas en que la enfermedad puede manifestarse.
Las larvas pueden tener muy poca decoloración, creando un saco flácido y blanquecino que se parece mucho a un caso temprano de cría de yeso. Las larvas pueden sucumbir a muchas edades diferentes, creando una sustancia marrón de varias formas y tamaños, similar a lo que puede ocurrir con el síndrome del ácaro parásito. Las larvas pueden incluso sucumbir a la infección después de ser operculadas, cuando comienzan a alargarse hasta convertirse en prepupas, produciendo un casquete hundido, a veces perforado, con una escama sospechosamente parecida a la loque americana (AFB) debajo.
Ahora, se espera que los veterinarios también puedan diagnosticar la enfermedad. Afortunadamente, hace más de una década se desarrolló un kit de prueba de campo EFB, que utiliza lo que se llama un «dispositivo de flujo lateral», pero no se había validado en América del Norte. , hasta ahora.
probando la prueba
«El dispositivo de flujo lateral es una herramienta increíblemente útil, siempre que funcione”, dice la Dra. Meghan Milbrath, profesora asistente de la Universidad Estatal de Michigan. Milbrath y sus colegas evaluaron recientemente estos kits de prueba EFB,1 que son fabricados por Vita Bee Health, y compararon los resultados con otros dos métodos de diagnóstico: microscopía y PCR («reacción en cadena de la polimerasa», una prueba que detecta material genético de bacterias EFB), los cuales son técnicas muy sensibles. La variación de la cepa EFB, que podría permitir que la enfermedad escape a la detección, y la escasez de datos sobre qué cepas están circulando, dicha validación es necesaria para medir la confiabilidad del kit.
«Los resultados de los tres métodos parecen coincidir muy bien con las muestras positivas”, dice Milbrath. «Si una muestra resultó positiva para PCR, también resultó positiva para el dispositivo de flujo lateral y resultó positiva usando el microscopio». Si bien hubo un puñado de muestras con resultados inconsistentes, la mayoría de las veces, los datos de los tres métodos coincidieron.
Los investigadores encontraron que la sensibilidad del kit, o el porcentaje de colonias que dieron positivo con el kit que también dio positivo por PCR (el estándar de oro), fue del 89,5 %, mientras que la sensibilidad de la microscopía fue del 97,4 %. veces, dada una muestra de larva sospechosa, el kit de prueba de campo detectó correctamente EFB.La microscopía obtuvo una puntuación aún más alta, pero la técnica requiere equipo especializado y capacitación.
«Si un apicultor sospecha que tiene loque europea, es bueno saber que puede salir, usar la prueba de campo y sentirse bastante seguro cuando obtenga un resultado positivo». Milbrath recomienda que los apicultores tengan AFB y EFB kits de prueba a la mano, y señala que para obtener los mejores resultados para EFB, se debe tener cuidado para seleccionar larvas que muestren solo signos tempranos de infección.
cómo funciona
El kit de prueba de campo utiliza la misma tecnología de flujo lateral que las pruebas rápidas de antígeno de COVID-19. Para usarlo, se mezcla completamente una muestra biológica (ya sea una larva descolorida o un hisopo nasal) en una botella de líquido que viene con el kit. luego, se dispensan unas pocas gotas del líquido en un pequeño pozo de muestra en el casete de flujo lateral.
El material absorbente en el casete transporta la muestra líquida a través de una cámara que contiene anticuerpos vinculados a diminutas partículas coloreadas.Si la muestra está infectada, esos anticuerpos se pegarán como velcro a las moléculas («antígenos») que provienen del patógeno y se extraerán. en la siguiente cámara, donde todo el trabajo, incluidas las partículas coloreadas, se adherirá a más anticuerpos que se fijan en su lugar en línea recta.
Si la prueba funcionó correctamente y aparece una línea azul en la posición etiquetada como «T» (para «prueba») en la ventana de visualización, la muestra es positiva para EFB. Si la prueba funcionó se indica mediante otra línea en la posición «C». (para «control»), que detecta proteínas larvales regulares que deberían estar presentes en cada muestra. Los resultados de la prueba se pueden leer en solo unos minutos.
Estos kits de prueba cuestan alrededor de $ 15-16 por casete y solo se pueden usar una vez. Eso es mucho más barato que los diagnósticos de PCR, sin la molestia de enviar muestras o largos tiempos de espera para obtener resultados. Sin embargo, como señaló Milbrath, había un puñado de colonias (6 de 77) positivas para EFB por PCR y microscopía, pero negativas según el kit. Esto significa que, aunque poco frecuentes, los kits tienen el riesgo de resultados falsos negativos.
En este punto, no está claro si el EFB en esas seis colonias escapó a la detección del kit debido a la variación de la cepa o algún otro problema con el kit. Este será un punto importante a distinguir, porque si es un problema con el kit, eso podría superarse mediante el uso de dos pruebas por colonia, mientras que si la variación de la cepa hace que los antígenos sean irreconocibles para los anticuerpos del kit, las pruebas repetidas no convertirán un resultado falso negativo en positivo. Este tipo de evasión de detección se ha documentado en Japón,2 pero la prevalencia de la cepa ofensiva en otros lugares no está clara.
Milbrath y sus colegas ahora están secuenciando las muestras para ver qué cepas de EFB albergan.Actualmente, el kit se fabrica utilizando solo un tipo de anticuerpo contra un antígeno de EFB específico, por lo que, si la variación de la cepa es un problema generalizado, se tendrían que usar nuevos casetes. desarrollarse utilizando múltiples anticuerpos diferentes para solucionar el problema.
En este estudio, los investigadores no evaluaron la frecuencia de los falsos positivos, es decir, dada una larva sana, ¿con qué frecuencia la prueba decía incorrectamente que la larva tenía EFB? Dado lo que sabemos sobre otras pruebas rápidas de antígenos, es poco probable que esto Sucede a menudo si el kit se usa correctamente, y no dependería de la cepa EFB, como sucede con los falsos negativos. A pesar de este problema, una sensibilidad de casi el 90 % es un gran impulso para la confianza del kit. Y los resultados son prácticamente inmediatos. , que le permite tomar decisiones de gestión de inmediato, mientras que cuando se informan los resultados de PCR, puede ser demasiado tarde.
Peter Fowler, veterinario y estudiante de posgrado en el estado de Michigan que trabajó con Milbrath en el estudio, dice que el método de microscopía es rápido pero requiere equipo y conocimientos especializados. Por lo general, una pequeña cantidad de muestra de larva se mezcla con agua en un cubreobjetos. , secado, teñido con un tinte específico, luego invertido en un portaobjetos con una capa de aceite y visto bajo un microscopio.
«Sería genial si los apicultores pudieran usar esta técnica para ayudar a diagnosticar enfermedades, pero se necesita práctica y capacitación para diferenciar algunos de estos organismos», dice Fowler, y agrega que la microscopía sería particularmente beneficiosa para que los veterinarios la usen para ayudar…
